小伙伴关心的问题:储备液的保存时间(贮存液配制及贮存要注意什么事项呢),本文通过数据整理汇集了储备液的保存时间(贮存液配制及贮存要注意什么事项呢)相关信息,下面一起看看。

储备液的保存时间(贮存液配制及贮存要注意什么事项呢)

1.30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】将29g 丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH 值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2 体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

2.40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g 丙烯酰胺(DNA 测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA 序列测定。

3.放线菌素D溶液

【配制方法】把20mg 放线菌素D 溶解于4ml 100%乙醇中,1:10 稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读OD440值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml 的放线菌素D 溶液在440nm 处的吸光值为0.182,放线菌素D 的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。

【注意】放线菌素D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm 波长处的光吸收确定放线菌素D 的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。

4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

【配制方法】在0.8ml 水中溶解60mg ATP, 用0.1mol/L NaOH 调至pH 值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃

5.10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把770g 乙酸酰溶解于800ml 水中,加水定容至1L 后过滤除菌。

6.10%过硫酸铵溶液

【配制方法】把1g 过硫酸铵溶解于终量为10ml 的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。

7.BCIP溶液

【配制方法】把0.5g 的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃

8.2×BES缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积90ml 的蒸馏水溶解1.07g 盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和0.027g Na2HPO4,室温下用HCl 调节该溶液的pH 值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。

9.1mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在200ml 蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成10ml 小份贮存于-20℃。

【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。

10.2.5mol/L CaCl2 溶液

【配制方法】在20ml 蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成1ml 小份贮存于-20℃。

11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

【配制方法】用20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml 小份贮存于-20℃。

【注意】DTT 或含有DTT 的溶液不能进行高压处理。

12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

【配制方法】把每一种dNTP 溶解于水至浓度各为100mmol/L 左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris 碱分别调节每一dNTP 溶液的pH 值7 .0(用pH 试纸检测),把中和后的每种dNTP 溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP 的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L 的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。

碱基

波长(nm)

消化系数(ε)[L/(mol·cm)]

A

259

1.54×104

G

253

1.37×104

C

271

9.10×103

T

260

7.40×103

比色杯光径为1cm 时,吸光度=εM

13.0.5mol/l EDTA(pH8.0) 溶液

【配制方法】在800ml 水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH 调节溶液的pH 值至8.0(约需20g NaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

【注意】EDTA 二钠盐需加入NaOH 将溶液的pH 值调至接近8.0, 才能完全溶解。

14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)

【配制方法】在100ml 水中加入1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。

15.2×HEPES缓冲盐溶液

【配制方法】用总量为90ml 的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g 葡聚糖和1gHEPES ,用0.5mol/l NaOH 调节pH 值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成5ml 小份,贮存 -20℃。

16.IPTG溶液

【配制方法】IPTG 为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml 蒸馏水中溶解2g IPTG 后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成1ml 小份贮存于-20℃。

17.1mol/L乙酸镁溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解214.46g 四水乙酸镁,用水定容至1L 过滤除菌。

18.1mol/L MgCl2溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】MgCl2 极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。

19.β-巯基乙醇(BME)溶液

【配制方法】一般得到的是14.4mol/L 溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。

【注意】BME 或含有BME 的溶液不能高压处理。

20.NBT溶液

【配制方法】把0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

21.酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris ·HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris ·HCl(pH=7.6)液层 , 保存于4℃。

【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

22.10mmol/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

【配制方法】用异丙醇溶解PMSF 成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml 的贮存液(100mmol/L)。

【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF 污染的衣物应予丢弃。

PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随pH 值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH 值为8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF 溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl 调节溶液的pH 值至7.4 加水定容至1L,在15lbf/in2 (1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

24.1mol/L乙酸钾(pH=7.5)溶液

【配制方法】将9.82g 乙酸钾溶解于90ml 纯水中,用2mol/L 乙酸调节pH 值至7.5 后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。

25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

【配制方法】在60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入11.5ml 冰乙酸和28.5ml 水,即成钾浓度为3mol/L 而乙酸根浓度为5mol/L 的溶液。

26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

【配制方法】在80ml 水中溶解408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH 值至5.2或用稀乙酸调节pH 值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。

27.5mol/L NaCl溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解292.2g NaCl 加水定容至1L,分装后高压灭菌。

28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

【配制方法】在900ml 水中溶解100g 电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH 值至7.2,加水定容至1L,分装备用。

【注意】SDS 的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS 溶液无须灭菌。

29.20×SSC溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解175.3g NaCl 和88.2g 柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH 溶液调节pH 值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

30.20×SSPE溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O 和7.4g EDTA,用NaOH 溶液调节pH 值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌。

31.100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在装有500g TCA 的瓶中加入227ml 水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。

32.1mol/L Tris溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解121.91g Tris 碱,加入浓HCl 调节pH 值至所需值。

pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定pH 值,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

【注意】如1mol/L 溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris。

尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris 溶液的pH 值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

Tris 溶液的pH 值因温度而异,温度每升高1℃,pH 值大约降低0.03 个单位。例如:0.05mol/L 的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH 值分别为9.5、8.9 和8.6。

33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/lTris)

【配制方法】在800ml 蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl 和3g Tris 碱,加入0.015g酚并用HCl 调至pH 值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在 151bf/in2(1.034 ×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。

34.X-gal溶液

【配制方法】X-gal 为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D 半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal 配制成的 20mg/ml 的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal 溶液无须过滤除菌。

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