​复试资料：微生物实验篇（6）

复试资料：微生物实验篇（6）

第六期，我感觉比较重要的微生物实验已经列完了，还有学长不卖资料，不用再问学长我有没有资料了。

大肠菌群（M.R.N.）检验原理流程思考Ames法检测诱变剂和致癌剂原理细菌生长曲线测定原理厌氧菌的分离和培养原理其他内容...

大肠菌群（M.R.N.）检验

原理

大肠菌群系指一群能「发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌」。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。 食品中大肠菌群数系以每100g（或mL）检样内大肠菌群最近似数（The most probable number-简称MPN）表示。

流程

思考

大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？

答：胆盐对很多杂菌有抑制作用，但是对大肠杆菌不造成影响。且大肠杆菌发酵乳糖，产酸产气，是一个很明显的特征。

为什么大肠菌群的检验要经过复发酵才能证实？

答：在进行食品中大肠菌群数的测定时，要进行复发酵实验，目的是排除能够产酸产气的杂菌对测定大肠菌群的干扰，确保检验结果准确、可靠。

复发酵时为什么使用乳糖发酵管但不需加胆盐？

答：使用乳糖发酵的方法是鉴定大肠菌群而非大肠杆菌的方法。胆盐有抑制肠道细菌的生长的作用，但是对大肠菌群抑制作用较弱。当经过初发酵、EMB选择、革兰氏染色多次选择初筛后，无需再添加胆盐，直接转接乳糖发酵管培养即可，产酸产气后就可鉴定为大肠菌群。

Ames法检测诱变剂和致癌剂

原理

食品安全无论怎样强调都不会过分，迅速而准确地检测致癌物质是食品安全问题的重要方面。Ames等人发现90％以上的诱变剂是致癌物质，由此，他们创立了一种快速测定法，「即利用是否能引起鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型（hisˉ）菌株的回复突变来判断化学物质是否诱变剂和致癌剂，并能区别突变的类型（置换或移码突变）」。

有的致癌物的诱变性是被哺乳动物肝细胞中的羟化酶系统活化的，而细菌却没有这种酶系统，故加入鼠肝匀浆的酶系统能增加检测的灵敏度。鼠伤寒沙门氏菌，对化学致癌物来说，不是决定性的试验。但是，目前各地资料表明，Ames试验阳性和致癌之间有十分明显的相关性。根据Ames本人对300余种化学品进行的微生物诱变试验及动物诱癌试验对比，发现二者之间存在着非常明显的一致性。 Ames试验的优点是，方法灵敏，检出率高，经试验有90％的化学致癌物都可获得阳性结果；加之方法比较简便、易行，不需特殊器材，容易推广。缺点是，微生物的DNA修复系统比哺乳动物简单，基因不如哺乳动物多，不能完全代表哺乳动物的实际情况。尽管如此，由于存在着上述的优势，故目前在致突变试验中占重要位置，为首选的试验方法。

细菌生长曲线测定

原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。「依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期」。这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于「细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比」，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。

厌氧菌的分离和培养

原理

目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术，而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。 亨盖特厌氧滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害 *** 菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。

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