本
文
摘
要
一、常用的检查方法
【一、临床检查法】
1.皮肤刮片检查
皮肤刮片是兽医临床上最常用的皮肤病检测方法之一，该方法简单而快捷，能鉴别出多种类型的寄生虫感染。尽管皮肤刮片不是每一次都能提供诊断性依据，但因其简单且价格低廉的特点而使其成为皮肤病检测最常用的方法之一。
一些临床工作者喜欢重复利用钝性刀片进行皮肤刮片，但是，随着(人们)对传染性疾病(巴尔通体、猫白血病、猫艾滋病、疱疹病毒、 *** 状瘤病毒等)防范意识的增加，这一现象会被逐渐的减少。
皮肤刮片分浅表皮肤刮片和深层皮肤刮片
浅层皮肤刮片用于疥螨、姬螯螨、耳螨、恙螨的观察
深层皮肤刮片主要用于蠕形螨病的诊断
2.细胞学检查
皮肤细胞学检查是第二个最常用的皮肤病检测技术，主要用于细菌、真菌，浸润细胞、肿瘤细胞和棘状细胞的鉴定。
3.透明胶带法:
可用于多种皮肤疾病的检测。
4.耳试子检查:
可检查外观正常的耳道其内部是否有渗出性病变，用于鉴定外耳道是否存在寄生虫、真菌、细菌感染。
5.拨毛检查:
拔毛检查用于观察毛发的状况，可完成对机体的瘙痒状态、真菌感染、色素沉着、生长周期等方面的评估。
6.伍德氏灯检查:
伍德氏灯所用的光源是波长为340-450nm的特殊紫外光，该波段的紫外光不会损伤皮肤或眼睛，能使一些微生物如小孢子代谢产生的色氨酸代谢物发出苹果绿样的荧光，但是，不是所有的小孢子菌都会产生这种细胞代谢产物，只高大约50%的犬小孢子能通过伍德氏灯法检查出来。伍德氏灯检查法无法检测出毛癣菌属和石膏样小孢子菌属。
7.玻片压诊法
主要用于鉴别血管扩张和皮下血肿
【二、特殊检查法】1.培养法:
用于鉴定特异性病原微生物
DTM(真菌检测培养基)用于皮肤真菌的分离与鉴定，皮肤真菌检测培养基由特殊的材料组成，它能抑制细菌的生长，而当真菌存在时培养基变成红色。
细菌/真菌的培养在皮肤病诊断上具有重要的作用，任何深层蜂窝织炎特别是已经形成漏道的蜂窝织炎都应该进行细菌/真菌的培养，当进行鉴别诊断时，囊肿和肿瘤也应应该进行病原微生物的培养检测。
2.活组织检查:
对兽医工作者来说，活组织检查是一件让人非常头疼的检测技术。病变部位的正确选择对提高皮肤活组织检查结果的可靠性具有重要的意义。
皮肤活组织检查能在极短的时间内能提供最有用的信息，尽管皮肤组织病理学不能正确的鉴定出病因，但是他们能够将皮肤病变定性为1-6种常规的类别:肿瘤性、感染性、免疫介导性、内分泌样、角化缺陷、过敏。
3.PCR技术:
聚合酶链式反应能将样晶中的DNA进行扩增，相对于真他检测技术，PCR技术具有更高的敏感性和特异性。
4.免疫组化:
无可替代的用于诊断自体免疫性皮肤病方法
5.过敏实验:
用于下面的情况：1.出现过敏性皮肤病临床症状的动物。2.活组织检查/皮肤刮片提示过敏状态的动物
6.治疗性诊断法
确定皮肤过敏原或感染原二、操作技术1.浅表皮肤刮片:
●(根据需要)修剪被毛，暴露病变皮肤
●矿物油擦拭刮片区域，去除皮肤表面的碎物以利于刮片的进行
●持一钝性手术刀片，垂直于皮肤，用适量的力度沿毛发生长的方向进行刮片取样
●如果寻找疥螨，较大面积刮取(1-2英尺)可增加疥螨发现的可能性，因为疥螨生活在皮肤浅层，因此没有必要一直刮取到渗血为止。最常检出疥螨的区域包括耳缘、肘后。一些报告还称，猫患蠕形瞒时最常检测出的部位是肩两侧
2.深层皮肤刮片:
●选择脱毛区域(如果可能)，毛发较多时可进行修剪以暴露皮肤
●持一钝性手术刀片，垂直于皮肤，用适量的力度沿毛发生长的方向进行刮片取样
●重复几次刮片后，皮肤会呈现粉红色，此时可见毛细血管及真渗出的血液，这样做的目的是保证收集的病料来自于皮肤的深层，包含毛囊内的蠕形瞒
●挤压刮取处的皮肤使毛囊内的蠕形瞒出现在皮肤浅表，这样更有利于病原微生物的采集
●如果刮片过程中没有收集到少量血液，那么蠕形螨可能会离开毛囊，从而导致(再次取样时)出现假阴性。某些情况如外伤性或感染性的瘢痕形成，刮片很难进行到皮肤深层，进而导致很难收集到大量的蠕形螨，但这样的情况比较少见，可通过活组织检查发现毛囊内的蠕形螨。
3.直接压片:
●湿性分泌物主要采取于脓包、溃疡、靡烂、漏道性皮肤损伤或皮肤表面的痂被被去除后暴露的潮湿性皮肤表面。
用载玻片的一角或注射针头产生机械性丘痊样损伤，然后挤压损伤处产生湿性分泌物。多次用载玻片黏贴藓化样病变部位或用干燥手术刀片收集病料后将病料展到干燥的载玻片上来进行酵母性皮肤病的取样。
●无论是用何种技术，务必风干载玻片
●用商业化的细胞染料对干燥的载玻片进行染色处理(改良的瑞氏染色DiffQuik最常用)并轻轻冲洗
●低倍镜下扫描载玻片，选择一理想区域进行高倍镜检查(40x物镜或者1OOx油镜)，确认每个细胞、细菌、真菌的类型
4.细针抽吸
●选择针头(22-25ga)和针筒(6cc)进行组织样吸取，针筒越小提供的负压越大
●(根据需要)用酒精或洗必泰清洁待抽吸部位。
A:固定病变区域，注射器针头刺向病变中心，回拉注射器柄产生负压，松开注射器柄，调整针头方向，再次回拉注射器柄，当发现针头尾部出现血液肘，停止回拉注射器(血液会稀释细胞样品)。
B:注射器针头刺入病变区域，(取出)重新调整方向，再次刺入，重复该过程。这种技术可以减少血液的稀释作用，更适用于软组织病变。
●在退出注射器之前，松开注射器柄，消除负压
●分离针头与针柄，回拉针柄，重新连接针头、针筒，快速推动针柄，将针头组织样品吹于载玻片上，重复该过程几次
●涂片并染色处理
●低倍镜下扫描整个载玻片，选择一理想区域进行高倍镜观察，使用高倍镜(40X物镜或者100x油镜)观察浸润的细胞类型和异性细胞
5.透明胶带:
●准备一段2-3英尺的透明胶带
●将胶带反复黏贴在病变处
●将胶带粘贴在玻璃载玻片上
●(根据需要)染色，注意:该过程不需要进行第一步的乙醇染色(会移去胶带)
●胶带可充当盖玻片，在高倍镜下查找微生物。透明胶带观察螨虫显微镜检查病原微生物时，胶带法是一种很好的用于采集姬鳌螨和虱子样品的检测方法，姬鳌螨体型较大，在视野中易于发现，因此，一张胶带有时就高可能收集到姬整螨，并且胶带有利于姬鳌螨的固定。
胶带观察毛发
胶带可以固定载玻片上毛发的位置，样品在低倍镜下观察(4X-10X物镜),在片上加一滴矿物油更有利于观察。
胶带观察酵母菌
尽管没有培养基那么有效，但是胶带法仍然是诊断马拉色菌性皮肤病最有效的手段之一，快捷而简单，虽然这种方法高效，但是所高的酵母菌采集技术常常会出现假阴性结果。
6.耳拭子检查:
●将棉签轻轻插入耳道，旋转
●(如果需要)用矿物油将从耳道内取出的黑色蜡样物质进行溶解，用棉签搅拌，在载玻片上抹片
●如果是脓性分泌物，在载玻片上轻微的滚动棉签
●风干脓性分泌物涂片，细胞学染液进行染色(改良瑞氏染液：DiffQuik7)
●低倍镜下观察整个片子以找到螨虫感染的证据，一般而言，耳螨比较容易找到，但是，下调聚光器、浏览整个片子可以会增加发现耳螨的可能性。
如果棉签仅仅收集到少量且干净的样品，那么这个耳朵有可能是健康的
如果样品螨虫非常具有意义(耳瞒、蠕形瞒)
如果样品为浅棕色或脓性渗出物，应进行细胞学检查以鉴别细菌和酵母菌的存在。
耳道细胞学检查对于确定继发感染的类型、治疗方案的合理选择非常有必要，另外，耳道细胞学检查对于治疗效果的评价也具有一定的意义，特别是针对没有完全治愈的耳炎，在这些病例中，耳道分泌物细胞学检查能够确定微生物的数量和类型有没再增加，这在治疗过程的过早中止或者具有重要的意义。
7.真菌检测培养基法
●将真菌检测培养基恢复到室温(在接种样品前将培养基保持在室温高利于加快真菌的生长)
●用酒精擦挝、消毒取样区
●等待酒精干燥
●用无菌镊子收集病变处毛发、鳞屑、痂皮，收集伍德氏灯检查呈现阳性的毛发可增加诊断的准确性
●接种收集的样本与室温状态的培养墓上，注意不要将样本置于培养基中，具有较大且可移动盖子的培养基更有利于样晶的沉积(标准的有盖培养皿)
●对无明显损伤的动物(亚临床携带者)，可用这一新的毛刷刷物动物整个被毛，收集样品，然后接种到培养板上
●病变爪的培养可以通过下面的方式进行:剪掉病变趾/指，修剪表面得到一定的样品，接种到培养基上。生长于角蛋白结构上的皮肤真菌会引起特征性的甲营养不良表现。
●每天检查DTM培养基，持续2-3周。皮肤真菌感染的动物样品，培养基会很快的出现白色/浅黄色蓬松样结构。一些污染物也会使培养基变成红色，但是这种现象是几天以后才会发生的事情。如果培养基不是每天都观察，那么就不可能对真菌菌落生长造成的培养基颜色变化进行一个很好的评估，真菌在培养基上生长几天后，就会出现大甩子，温度适直、环境潮湿高利于分生孢子的形成。
●用透明胶带轻轻的接触将要进行评估的培养基上生长的真菌菌落，然后将胶带黏贴于载玻片上，滴加细胞染色液进行染色
●检查载玻片以发现真菌的类型，大分生孢子在低倍镜(10X)下通常非常明显。犬身上出现犬孢子常常是继发于环境周围存在不表现临床症状的携带真菌的猫。毛癣菌或小孢子菌提示真菌感染是周围环境引发的(猫除外)。
8.拨毛
●拨取少量待检查毛发
●用矿物油或透明胶带固定毛发样品
●低倍镜下观察样晶(4X/10X)
发尖：
发尖的评估主要目的是观察机体物是否处于瘙痒状态(特别是猫)、是否为非创伤物毛发发尖通常是折断的、能够很容易辨认，这在主人没奋发现猫瘙痒而实际上猫已经处于瘙痒状态的情况来说具有非常重要的意义。
发根:
发根的检查可诊断毛发的生长期和静止期从而确定毛囊周期是否正常，对多数动物而言，大部分的毛发处于静止期，只有一小部分毛发处于生长期。在一些生长期很长的动物(如贵宾犬)，大部分的毛发可能处于生长期，相对少量的毛发处于静止期。在静止性脱毛疾病中，所高的毛发都处于静止期。
毛干:
在真菌感染的患畜，有时可以看到毛外癣菌。毛外癣菌比较难以发现，可用KOH和细胞染液将过多的角蛋白溶解掉。毛发的皮质看起来膨胀、有损伤，如果折断则有缺口(像扫帚样)，病原微生物(小球形结构)可能会围绕毛干损伤的周围。毛干也可用于色素形成的观察，毛干上色素
形成通常提示色素突变稀释性脱毛和毛囊发育不良。卵也有可能发现与毛干上，主要为莎拉堤拉恙虫和虱子的粪便。毛干上真他异常也见报道，但较少。
9.伍德氏灯检查法
●预热机器(以产生稳定的光波)
●在暗室中进行检查
鳞屑和局部的药物会导致假阳性的出现，真性皮肤真菌感染会在毛干上出现苹果绿荧光，所有的真菌性感染都应该通过真菌培养来确定。
10活组织检查
可通过以下方面方法增加皮肤活组织检查的可靠性:
●从不同的代表性区域取几个皮肤活组织样品
●进行所有异常组织的活检
●根据临床病变症状、诊疗效果等方面做出鉴别诊断单，并提交给病理学专家
●积极坚持一个组织病理学报告中包含对病变的描述、鉴别诊断过程进行的依据
●实行皮肤病理学检查是为了增加诊所兽医和训练这些病理学家病变部位的选择
●样品最好是取自原发性皮肤病变部位（脓疱、囊泡、瘀斑、丘疹、红斑)。继发性病变(脱毛、鳞屑、溃疡、糜烂)对诊断可能会有一定的作用但意义不是那么重要。好的取样方案是保证取样至少3处取样以保证能得到更全面的病变类型，一般来说，所有的病变部位都应该进行活组织取样。鼻子和脚垫在取样过程中比较敏感，但是这两个部位通常是自体免疫性皮肤病常受影响的部位，他们的取样需要镇静和全身麻醉。
操作:●组织取样区确定后，应避免该部位再次受到创伤，在取样前禁止清洁表面，因为这个过程有可能会移除对诊断高重要意义的鳞屑和表面的痂。
●皮 *** 射一定的局麻药，注意不要太过于浅表，因为太浅会造成组织结构变形，利多卡因可能会降低一些感染性微生物的活力，因此应禁止应用于组织团块的培养。
●使用一次性Bakers穿孔器进行活组织检查，将活检穿孔器放于病变处，施加一定的压力，旋转活检穿孔器。一旦穿孔器穿透皮肤全层，移开穿孔器，此时皮肤样品与皮下脂肪相连。
●注意不要损伤皮肤样品，用镊子抓住皮肤样品下层的脂肪，后切除皮肤样品上的脂肪
●如果皮肤较薄或病理学家需要确定真来源，可将样品放于一固定基板上
●样品保存于10%的福尔马林溶液中真他方法:
1.用手术刀切一椭园形的切口以获得活组织检查样本，该方法主要用于大面积的病变
2.缝合切口
指活检
1.软指
常见皮肤病检查万法
用8mm长的Bakers穿孔器在指/趾的侧面、爪床的侧面、爪基的侧面进行活检取样，该项技术仅仅适用于爪部比较柔软的情况
●硬指
如果爪比较坚硬，切断第三指/耻，显然，主人一般是不会愿意这样做的，因此，为了降低真他部位的组成的影响，此时可进行悬趾的切除
一旦样品采集完成，立即进行伤口的缝台
培养:
●打开一个将培养样晶
●去除样品表面所有的脓性分泌物，用新鲜生理盐水清洗病变
●收集新鲜分泌物，后送检到微生物学实验室，这种清洁技术可以降低被污染的
【微生物的数量】●耳部样晶应该在清洗前取样
深部皮肤培养：1.术前准备将要进行取样的组织，用生理盐水冲洗取样部位(消除消毒剂对病原微生物的损伤)
2.用无菌的Backer穿孔器/手术过程取样
3.将样品放于无菌的容器中(滴加一滴新鲜的生理盐水)、冷藏、装样，注意为增加测试的准确性勿冷冻样品.实验室工作人员应进行皮肤组织块培养。
11.PCR技术:
PCR技术在兽医临床门诊上还无法广泛应用，一些实验室利用PCR检测分支杆菌和真菌微生物，因为PCR技术发展非常快速，因此，与诊断实验室的合作对疾病诊断的可靠性具有一定的意义。
12.免疫染色技术:
直接免疫荧光法应用于兽医临床已有30多年的历史，但是该方法的准确性和重复性具有一定的争议性，身体不同的部位对直接免疫荧光法的结果具有很大的影响，脚垫手口鼻样面有11%-78%的假阳性存在。另外，实验室诊断表明存样具有很差的重复性。目前，最新的技术包括免疫过氧化物和单克隆抗体能提供更准确的结果，但是他们的应用高限。
过程:
●通过标准活组织检查技术收集皮肤样品
●将样品放于Michelles防腐剂中，
●(根据需要)免疫过氧化物酶染色时，将样品放于10%福尔马林中为增加测试的可靠性和样品要求，可与专业的诊断实验室联系。
13.玻片压诊法:
●将载玻片放置于红色病变处，并施加一定的压力
观察施加一定压力于病变处后皮肤颜色的变化，载玻片下的皮肤要么是白色(血液被排出该部位)，要么是红色。荨麻疹样病变通常是因为血管扩张引起渗出性变化但是没有红细胞出现，因此，红色病变会在一定压力下呈现白色。瘀斑是因为血液流出血管造成的，在一定压力下病变皮肤仍然是红色的。
14.过敏测试:
血清免疫球蛋白试验:
发生过敏反应的犬其血清免疫球蛋白水平会升高，从而使识别抗原特异性抗体和测定真水平成为一种可能，一些公司已经可以提供这样的测试板，而且在任何环境中都可以进行操作。一般来说，患病动物不需要按照常规的过敏测试所需要的停止给药以免影响结果这一要求。因为这些测试主要是测量免疫反应的成份，因此抗感染药物会对结果杳一定的影响，在进行皮内过敏试验前，停止类固醇激素的给予，一些公司的血清免疫球蛋白测试中包含停止给予类固醇这一要求
皮内过敏测试:
皮内过敏测试是近年来被认为是最好的诊断犬异位性皮炎的黄金规则，被绝大多数皮肤病专家所应用，皮内过敏测试可以让我们对发生过敏反应的皮肤进行检测，大多数动物能够耐受这个过程，并且这个测试结果也比较可信。待检测动物应该给以一定的镇静以减少应激、测试前停止给予抗组胺药10-14天、停止内固醇药物至少4周，所使用的抗原必须要细心保存以保证高质量的测试原料，一般而言，测试中应包含至少40种以上的过敏原以保证足够的过敏原测试范围。
过程:
●给予一定的镇静药物(减少应激)
●用40#的刀片在胸部两侧修剪一定区域，主要不要损伤皮肤
●用记号笔划一网恪状提示注射的部位
●使用特殊的皮内注射器，给予过敏原0.5-0.1ml(被稀释到1000-1500PNU)
●等30min
●评估每个部位的红斑和膨胀程度，使用组肢和生理盐水来对比反应性，根据反应性将红斑和膨胀程度分为0-4级，阳性结果应该看起来像蜜蜂重伤后的表现:在反应的边缘有明显突起。隐形结果会在注射部位出现一定程度的膨胀，但是不会出现红疹和锐性突起。
皮内过敏测试盒血清免疫球蛋白测试的比较:
●在兽医临床，根据过敏检查方法的免疫疗效的比较性研究较少，有限的文献表明，基于血清学过敏测试的治疗真反应效果平均是60%，基于皮内过敏测试的治疗性效果平均是68%，因此，理想的过敏测试应该是同时进行血清免疫球蛋白测试和皮内过敏测试，而临床确实有大夫是这样操作的。
斑点测试:
●主要应用于测定人的过敏实验，在动物上还存在一定的争议性。
15诊疗性诊断试验
跳蚤过敏性皮炎:
最常见的皮肤疾病之一，通过洗澡可有效移除跳蚤和虱子从而使患病动物的症状出现明显改善，因此，腰部皮炎和所有瘙痒的猫都应该进行跳蚤性皮炎治疗性测试，塞拉菌素、氟虫腈治疗跳蚤性皮炎效果非常好，对跳蚤过敏的动物应该每2-3周进行给药治疗。在跳蚤与虱子等大量存在的环境中，需要花很久的时间才可以降低跳蚤与虱子的数量，此时，主人可能会发现治疗的效果不佳。
猫蠕形瞒病:
由蠕形螨引起，具有传染性，表现脱毛、瘙痒，在美国南部高发，蠕形螨可能难于发现，因此，4-6周给予石硫合剂可以用于猫蠕形瞒病的治疗性诊断。
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