本
文
摘
要
转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。
需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。
细胞传代
1. 试验准备：200ul/1mlTip 头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
2. 弃掉培养皿中的培养基，用 1ml 的 PBS 溶液洗涤两次。
3. 用 Tip 头加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分钟(37℃，5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。
4. 加入 1ml 的含血清培养基终止反应。
5. 用 Tip 头多次吹吸，使细胞完全分散开。
6. 将培养液装入离心管中，1000rpm 离心 5min。
7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择 0.8X106 个细胞加入一个 35mm 培养皿。
8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。
9. 将培养皿转入 CO2培养箱中培养，第二天转染。
细胞转染
1. 转染试剂的准备
① 将 400ul 去核酸酶水加入管中，震荡 10 秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20 摄氏度保存，使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA 质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3. 将混合液在室温放置 10―15 分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用 PBS 或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养 24－48 小时。
第二次细胞传代
1. 在转染后 24 小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。
2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度 0.8X105个细胞/35mm 培养皿将细胞重新转入培养皿中。
3. 在正常条件下培养 24 小时后按照染色要求条件固定。
其他实验技能分享：
实验笔记丨大肠杆菌转化实验（热击法）
实验笔记丨大肠杆菌感受态细胞制备实验（CaCl2 法）
实验笔记丨免疫细胞的分离、纯化和鉴定
实验笔记丨CAR T细胞活化水平以及增殖能力的检测
实验笔记丨Native PAGE 的步骤详解和注意事项
实验笔记丨病毒感染细胞实验的步骤详解（下卷）
实验笔记丨病毒感染细胞实验的步骤详解（上卷）
实验笔记丨B 淋巴细胞分离技术
实验笔记丨贴壁细胞的培养及转染
实验笔记丨蛋白质的表达、分离、纯化实验
实验笔记丨siRNA 表达载体的构建步骤详解和注意事项
实验笔记丨Transwell实验检测细胞侵袭能力
实验笔记丨SSR 分子标记实验的步骤详解和注意事项
实验笔记丨分子标记技术AFLP的步骤详解和注意事项
实验笔记丨荧光原位杂交实验（FISH）步骤详解和注意事项
实验笔记丨流式细胞仪样品制备的步骤详解和注意事项
实验笔记丨Southern Blot 步骤详解和注意事项
实验笔记丨Northern Blot 步骤详解和注意事项
实验笔记丨重组质粒的连接、转化及筛选
2D电泳超详细的protocol，非常的哇塞！
不能更详细！染色质免疫共沉淀（ChIP）实验方法
实验笔记丨Far western blotting实验步骤和重点考虑因素
科研日精进：实验笔记丨“圆二色光谱”实验方法和注意事项
科研日精进：实验笔记丨ELISA实验，你真的学废了吗？
科研日精进：实验笔记丨病毒滴度及生长曲线测定
科研日精进：实验笔记丨分子间相互作用分析——微量热泳动（MST）技术介绍
科研日精进：实验笔记丨免疫荧光细胞样品制备
科研日精进：实验笔记丨双荧光素酶报告基因验证法
科研日精进：实验笔记丨外源基因的原核表达及蛋白检测
科研日精进：实验技能丨2种常用的蛋白纯化的方法
科研日精进：实验技能丨酵母双杂交实验超详细protocol
科研日精进：实验技能丨免疫共沉淀的原理与方法
科研日精进：实验技能丨双分子荧光互补-BiFC技术详解
科研日精进：实验技能丨四个蛋白质分子对接在线工具
科研日精进：实验技能丨四个蛋白质序列分析在线工具
科研日精进：关于DNA定点突变的两种方法
科研日精进：Western Blotting实验中常见问题及解决方案
科研日精进：Western Blotting技术之转膜
科研日精进：Western Blotting技术之样品制备
科研日精进：Western Blotting技术之免疫检测
科研日精进：Western Blotting技术之免疫检测
科研日精进：Western Blotting技术之电泳
更多科研实验干货，请关注“科研日
