本
文
摘
要
一、背景
基因组DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而破坏细胞壁的特性。试剂盒利用了氯化苄的这一特性，将植物样品冻结融解后，再使用Pipet Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用试剂盒从实验开始至水相回收只需30分钟时间。
得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。剂盒纯化得到的基因组DNA的长度最长可达50kb左右，平均为30kb左右，最短为100bp的DNA也可以被纯化。如需获得更长的基因组DNA，对于哺乳动物样品，包括组织或细胞等，可以使用哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒。通过试剂盒获得的总DNA，OD260/OD280的范围通常在1.7至1.9之间。
DNA提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组DNA提取试剂盒、中量全血基因组DNA提取试剂盒、组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、CTAB植物基因DNA提取试剂盒、新型植物基因组DNA提取试剂盒、酵母基因组DNA提取试剂盒、M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒。
二、应用
用于环介导等温扩增（LAMP）技术检测旋毛虫DNA的研究：
通过建立高、中、低3种不同剂量旋毛虫感染小鼠模型,收集感染早期阶段的肌肉、血液、粪便样本进行LAMP检测,验证了该方法的高度敏感性和特异性,特别是对于肌肉中幼虫密度非常低时,该技术更突显其重要的检测和诊断价值。
研究证明LAMP法比PCR法更敏感、快速、简便,有望在提高人及动物旋毛虫病的早期诊断,旋毛虫病的现场检测、肉类检疫及流行病学调查等领域发挥更大作用。材料和方法：旋毛虫虫种、实验动物、基因组DNA的提取本实验所用的虫种,旋毛虫河南猪源株(Trichinella spiralis,T1),北方旋毛虫(T.nativa,T2)、伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)、南方旋毛虫(纳氏旋毛虫,T.nelsoni,T7),来自国际旋毛虫参考中心(International Trichinella Reference Centre,ITRC)本实验室昆明小鼠传代保种。
其他人体寄生蠕虫标本,包括似蚓蛔线虫、蛲虫、鞭虫、十二指肠钩口线虫、华支睾吸虫、布氏姜片虫、日本血虫、猪带绦虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫,均由本实验室保存。
6w龄健康雄性昆明小鼠(SPF级),体重20g~25g,购买并饲养于军事医学科学院实验动物中心。旋毛虫及其他样本基因组DNA的提取采用天根公司的血液/组织/粪便基因组DNA提取试剂盒。
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