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pcr原理及流程(pcr技术原理及基本过程)

PCR又称聚合酶链式反应,PCR的过程可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。

PCR的三个步骤分别是1.高温变性:利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,;2.低温退火:低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合;3.中温延伸:当调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链。

基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。它需要DNA模板,上下游引物,taqDNA聚合酶,dNTP以及缓冲液(镁离子很重要),当然还有超纯水。

当然现在实验室做PCR,买的缓冲液里面是直接加好聚合酶和dNTP的,可以直接用。

一般的25微升体系里DNA模板和上下游引物各1微升,PCR MIX12.5微升,ddH2O9.5微升。

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